（一）液相色谱分析实验室的概述

   主要体现在高效率分离，对复杂的有机化合物分离制取纯净化合物，定量分析和定性分析，仪器设备主要有：高效液相色谱仪，适宜于高沸点化合物、难挥发化合物、热不稳定化合物、离子化合 物、高聚物等，弥补气相色谱仪的不足。环境和实验室基础装备设计要求与气相色谙室相近。液相色谱法是指流动相为液体的技术。早期的液相色谱（经典液相色谱）是将小体积的试液注入色谱 柱上部，然后用洗脱液（流动相）洗脱。这种经典色谱法，流动相依靠自身的重力穿过色谱柱，柱效差(固定相颗粒不能太小)，分离时间很长。70年代初期发展起来的高效液相色谱法，克服了经典液相色谱法柱效低，分离时间很长的缺点。成为一种高效、快速的分离技术。高效液相色谱法是在经典色谱法的基础上，引用了气相色谱的理论，在技术上，流动相改为高压输送（***高输送压力可达4.9´107 Pa）;色谱柱是以特殊的方法用小粒径的填料填充而成，从而使柱效大大高于经典液相色谱（每米塔板数可达几万或几十万）；同时柱后连有高灵敏度的检测器，可对流出物进行连续检测 。

（二）高效液相色谱分析法的特点

 1.高压：液相色谱法以液体为流动相（称为载液），液体流经色谱柱，受到阻力较大，为了迅速地 通过色谱柱，必须对载液施加高压。一般可达150～350×105 Pa。      

2.高速：流动相在柱内的流速较经典色谱快得多，一般可达1～10ml/min。高效液相色谱法所需的分析时间较之经典液相色谱法少得多，一般少于1h 。      

 3.高效：近来研究出许多新型固定相，使分离效率大大提高。       

 4.高灵敏度：高效液相色谱已广泛采用高灵敏度的检测器，进一步提高了分析的灵敏度。如荧光检 测器灵敏度可达10-11 g。另外，用样量小，一般几个微升。      

 5.适应范围宽：气相色谱法与高效液相色谱法的比较：气相色谱法虽具有分离能力好，灵敏度高，分析速度快，操作方便等优点，但是受技术条件的限制，沸点太高的物质或热稳定性差的物质都难于应用气相色谱法进行分析。而高效液相色谱法，只要求试样能制成溶液，而不需要气化，因此不受试样挥发性的限制。对于高沸点、热稳定性差、相对分子量大（大于 400 以上）的有机物（这些物质几乎占有机物总数的 75% ～ 80% ）原则上都可应用高效液相色谱法来进行分离、分析。 据统计，在已知化合物中，能用气相色谱分析的约占20%，而能用液相色谱分析的约占70～80%。

 （三）检测器

(1)紫外光度检测器      

  它的作用原理是基于被分析试样组分对特定波长紫外光的选择性吸收，组分浓度与吸光度的关系遵守 比尔定律。***常用的检测器，应用***广，对大部分有机化合物有响应。     

特点：

a.灵敏度高：其***小检测量10-9g·mL-1 ，故即使对紫外光吸收很弱的物质，也可以检测；     

b. 线性范围宽；(比尔定律)      

c. 流通池可做的很小（1mm × 10mm ，容积 8μL）；     

d. 对流动相的流速和温度变化不敏感,可用于梯度洗脱；      

e. 波长可选，易于操作:如，使用装有流通池的可见紫外分光光度计（可变波长检测器）。    

缺点：对紫外光完全不吸收的试样不能检测；同时溶剂的选择受到限制。     

(2)光电二极管阵列检测器    

 紫外检测器的重要进展；阵列由1024个光电二极管阵列，每个光电二极管宽仅50μm，各检测一窄段波 长。如图所示，在检测器中，光源发出的紫外或可见光通过液相色谱流通池，在此流动相中的各个组分进行特征吸收，然后通过狭缝，进入单色其进行分光，***后由光电二极管阵列检测，得到各个组分的吸收信号。经计算机快速处理，得三维立体谱图。       

(3)荧光检测器      

 荧光检测器是一种高灵敏度、高选择性检测器。对多环芳烃，维生素B、黄曲霉素、卟啉类化合物、农药、药物、氨基酸、甾类化合物等有响应.荧光检测器的结构及工作原理和荧光光度计相似。      

(4)差示折光检测器   

  除紫外检测器之外应用***多的检测器。  差示折光检测器是借连续测定流通池中溶液折射率的方法来测定试样浓度的检测器。溶液的折射率是纯溶剂（流动相）和纯溶质（试样）折射率乘以各物质的浓度之和。因此溶有试样的流动相和纯流动相之间折射率之差表示试样在流动相中的浓度。     

(5)电导检测器      

其作用原理是根据物质在某些介质中电离后所产生电导变化来测定电离物质含量。